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형성이관찰될때까지10ng/ml의rmHGF가함유된3차배양액으로12일간하였다.
어배상체에서신경전구세포로분화중임을확인하였다.
얻어진간전구세포를배양하면서특성을파악하기위하여, 저정배지등유지배양조건을
신경전구세포에서신경세포로의분화연구는 현재신경전구세포로의분화및성상확인까
확립하였고, 간전구세포특이단백질및유전자확인, 세포주기를이용한성상확인법을확
지만확립된상태이며, 신경세포로의분화연구는제2세부과제인『동물줄기세포를이용한
립하였으며, 간전구세포의분화능을이용한성상확인기법도확립하였다. 이상에서확립된
독성평가기법 개발?확립 및 평가연구』에서 이어서 진행할 계획이다. 각각 확립된 분화
성상확인법을이용하여간전구세포의성상을확인하여본결과, 미분화마우스배아줄기세
세포주및작출기법은동물용의약품등의발생독성평가, 특이독성평가용모델, 유용물
포는치밀하고둥근다층의집락을형성하는데반해, 분화가완료된마우스배아줄기세포
질발굴, 특이질환모델개발등생명공학연구에다각적으로널리이용될수있을것으로
유래간전구세포는세포핵이커졌으며, 진한과립이세포질내다량침착되어있음을확인
기대된다.
할수있었다. 또한분화가완료된간전구세포는SSEA-1, ALB등특이단백질이더이상
발현되지않았으나, AFP, CK18, CK19, NESTIN등은지속적으로발현되었다. real time
PCR법을 이용하여 간전구세포의 특이 발현유전자의 발현정도를 확인한 결과, AFP,
Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획
G6P, TAT 및HNF3β의발현을확인하여간전구세포임을확인할수있었다. 세포주기를
대상기관
활용명
제 목
담당자
비고
(법령)
마우스배아줄기세포와비교해본결과는, 간전구세포는배아줄기세포에비해세포주기가
수과원
느려지고있음을확인할수있었다.
표준기술
조준형외
마우스 배아줄기세포 작출 및 유지배
(표준독성시험
완료
이상의실험에서얻어진간전구세포의분화능을확인하기위해, 우리는간세포분화배지및담
양기법
활용
6인
매뉴얼)
세포분화배지조건을 확립하였다. 간전구세포를 이용하여 간세포로 분화된 세포는 PAS염색을
수과원
표준기술
조준형외
통한glycogen 합성확인법, AFP, G6P, TAT, HNF3β등특이유전자확인법, 세포주기확인법으
마우스배아줄기세포성상확인기법
(표준독성시험
완료
활용
6인
로간세포임을확인할수있었다.
매뉴얼)
수과원
담관세포분화배지에서배양된세포또한, 현미결관찰시가지런히정렬된세포로둘러싸
표준기술
조준형외
마우스 배아생식세포 작출 및 유지배
(표준독성시험
완료(08.2.25)
인관형태의구조와중심부의간을원주상피세포가치밀하게둘러싸고있는구형의3차
양기법
활용
4인
매뉴얼)
원구조가관찰되었다.
수과원
표준기술
조준형외
마우스 배아암세포 작출 및 유지배양
위의 방법으로 우리는 마우스배아줄기세포 유래 간전구세포의 다분화능을 확인하였으며,
(표준독성시험
완료(08.2.25)
기법
활용
8인
간전구세포는간특이단백질을발현하고, 간세포, 담관세포로의분화할수있었다. 확립된
매뉴얼)
수과원
간전구세포는간독성평가시in vitro 모델로사용할계획이며동물용의약품의독성평가시
표준기술
조준형외
마우스배상체작출및유지배양기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
중요한역할을할수있을것으로기대된다.
활용
5인
매뉴얼)
백혈병등조혈기능관련질환의치료및연구에는골수에서채취한조혈세포를사용하는
수과원
표준기술
조준형외
것이 일반적이었으나, 실험동물사용에 따른 윤리적 문제 및 개체에 따른 골수 유전자의
마우스배아생식세포성상확인기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
활용
4인
매뉴얼)
다양성, in vitro 배양의어려움을해결하고자, 최근에는배아줄기세포를이용한조혈세포
수과원
표준기술
조준형외
배양기술개발및연구가활발히진행되고있는상황이다. 이에우리는확립된마우스배
마우스배아암세포 성상확인기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
활용
4인
아줄기세포를 이용하여 조혈세포세포 작출법을 확립하고, 그 성상을 확인하여, 축산물중
매뉴얼)
유해화학물질이조혈기능독성평가시활용하기위한연구를수행하였다.
수과원
표준기술
조준형외
마우스배상체성상확인기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
조혈세포작출을위해우선확립된마우스배아줄기세포를OP9 feeder layer위에서1차
활용
6인
매뉴얼)
분화배지를사용하여4일간배양한후, 2차분화배지로옮겨21일간추가배양하였다. 배
수과원
표준기술
마우스 배아줄기세포 유래 간전구세
조준형외
양결과분화가종료된세포는다층의응괴집락을형성했던배아줄기세포와는달리낱개의
(표준독성시험
완료(09.2.6)
활용
포작출·유지배양기법
6인
동그란형태가관찰되고, 조혈세포특이발현단백질인CD-117이강하게발현되는것으로
매뉴얼)
수과원
보아조혈세포임을확인할수있었다.
표준기술
마우스 배아줄기세포 유래 간전구세
조준형외
(표준독성시험
완료(09.2.6)
배아줄기세포유래신경세포는신경질환연구및신경독성메카니즘규명연구의귀중한자
활용
포성상확인기법
6인
매뉴얼)
원이 될 수 있다. 이에 우리는 신경독성과 연관된 독성물질 스크리닝등에 활용하기위해
수과원
표준기술
조준형외
신경전구세포작출기술및관련기술을구축하였다.
간세포분화유도및성상확인기법
(표준독성시험
완료(09.2.6)
활용
6인
매뉴얼)
신경전구세포를 작출하기위해 우선 마우스배아줄기세포를 EB배지에서 5일간 배양하여
수과원
표준기술
조준형외
배상체를작출하고, ITSF 배지에서8일간추가배양한결과, 둥근집락상태를유지하면서
담관세포분화유도및성상확인기법
(표준독성시험
완료(09.2.6)
활용
6인
주변부세포들이탈락한형태의신경전구세포를들을관찰할수있었다. 또한신경전구세
매뉴얼)
포특이발현단백질인CK8, NESTIN을확인한결과2차분화배양후양성반응을나타내
어배상체에서신경전구세포로분화중임을확인하였다.
얻어진간전구세포를배양하면서특성을파악하기위하여, 저정배지등유지배양조건을
신경전구세포에서신경세포로의분화연구는 현재신경전구세포로의분화및성상확인까
확립하였고, 간전구세포특이단백질및유전자확인, 세포주기를이용한성상확인법을확
지만확립된상태이며, 신경세포로의분화연구는제2세부과제인『동물줄기세포를이용한
립하였으며, 간전구세포의분화능을이용한성상확인기법도확립하였다. 이상에서확립된
독성평가기법 개발?확립 및 평가연구』에서 이어서 진행할 계획이다. 각각 확립된 분화
성상확인법을이용하여간전구세포의성상을확인하여본결과, 미분화마우스배아줄기세
세포주및작출기법은동물용의약품등의발생독성평가, 특이독성평가용모델, 유용물
포는치밀하고둥근다층의집락을형성하는데반해, 분화가완료된마우스배아줄기세포
질발굴, 특이질환모델개발등생명공학연구에다각적으로널리이용될수있을것으로
유래간전구세포는세포핵이커졌으며, 진한과립이세포질내다량침착되어있음을확인
기대된다.
할수있었다. 또한분화가완료된간전구세포는SSEA-1, ALB등특이단백질이더이상
발현되지않았으나, AFP, CK18, CK19, NESTIN등은지속적으로발현되었다. real time
PCR법을 이용하여 간전구세포의 특이 발현유전자의 발현정도를 확인한 결과, AFP,
Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획
G6P, TAT 및HNF3β의발현을확인하여간전구세포임을확인할수있었다. 세포주기를
대상기관
활용명
제 목
담당자
비고
(법령)
마우스배아줄기세포와비교해본결과는, 간전구세포는배아줄기세포에비해세포주기가
수과원
느려지고있음을확인할수있었다.
표준기술
조준형외
마우스 배아줄기세포 작출 및 유지배
(표준독성시험
완료
이상의실험에서얻어진간전구세포의분화능을확인하기위해, 우리는간세포분화배지및담
양기법
활용
6인
매뉴얼)
세포분화배지조건을 확립하였다. 간전구세포를 이용하여 간세포로 분화된 세포는 PAS염색을
수과원
표준기술
조준형외
통한glycogen 합성확인법, AFP, G6P, TAT, HNF3β등특이유전자확인법, 세포주기확인법으
마우스배아줄기세포성상확인기법
(표준독성시험
완료
활용
6인
로간세포임을확인할수있었다.
매뉴얼)
수과원
담관세포분화배지에서배양된세포또한, 현미결관찰시가지런히정렬된세포로둘러싸
표준기술
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마우스 배아생식세포 작출 및 유지배
(표준독성시험
완료(08.2.25)
인관형태의구조와중심부의간을원주상피세포가치밀하게둘러싸고있는구형의3차
양기법
활용
4인
매뉴얼)
원구조가관찰되었다.
수과원
표준기술
조준형외
마우스 배아암세포 작출 및 유지배양
위의 방법으로 우리는 마우스배아줄기세포 유래 간전구세포의 다분화능을 확인하였으며,
(표준독성시험
완료(08.2.25)
기법
활용
8인
간전구세포는간특이단백질을발현하고, 간세포, 담관세포로의분화할수있었다. 확립된
매뉴얼)
수과원
간전구세포는간독성평가시in vitro 모델로사용할계획이며동물용의약품의독성평가시
표준기술
조준형외
마우스배상체작출및유지배양기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
중요한역할을할수있을것으로기대된다.
활용
5인
매뉴얼)
백혈병등조혈기능관련질환의치료및연구에는골수에서채취한조혈세포를사용하는
수과원
표준기술
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것이 일반적이었으나, 실험동물사용에 따른 윤리적 문제 및 개체에 따른 골수 유전자의
마우스배아생식세포성상확인기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
활용
4인
매뉴얼)
다양성, in vitro 배양의어려움을해결하고자, 최근에는배아줄기세포를이용한조혈세포
수과원
표준기술
조준형외
배양기술개발및연구가활발히진행되고있는상황이다. 이에우리는확립된마우스배
마우스배아암세포 성상확인기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
활용
4인
아줄기세포를 이용하여 조혈세포세포 작출법을 확립하고, 그 성상을 확인하여, 축산물중
매뉴얼)
유해화학물질이조혈기능독성평가시활용하기위한연구를수행하였다.
수과원
표준기술
조준형외
마우스배상체성상확인기법
(표준독성시험
완료(08.2.25)
조혈세포작출을위해우선확립된마우스배아줄기세포를OP9 feeder layer위에서1차
활용
6인
매뉴얼)
분화배지를사용하여4일간배양한후, 2차분화배지로옮겨21일간추가배양하였다. 배
수과원
표준기술
마우스 배아줄기세포 유래 간전구세
조준형외
양결과분화가종료된세포는다층의응괴집락을형성했던배아줄기세포와는달리낱개의
(표준독성시험
완료(09.2.6)
활용
포작출·유지배양기법
6인
동그란형태가관찰되고, 조혈세포특이발현단백질인CD-117이강하게발현되는것으로
매뉴얼)
수과원
보아조혈세포임을확인할수있었다.
표준기술
마우스 배아줄기세포 유래 간전구세
조준형외
(표준독성시험
완료(09.2.6)
배아줄기세포유래신경세포는신경질환연구및신경독성메카니즘규명연구의귀중한자
활용
포성상확인기법
6인
매뉴얼)
원이 될 수 있다. 이에 우리는 신경독성과 연관된 독성물질 스크리닝등에 활용하기위해
수과원
표준기술
조준형외
신경전구세포작출기술및관련기술을구축하였다.
간세포분화유도및성상확인기법
(표준독성시험
완료(09.2.6)
활용
6인
매뉴얼)
신경전구세포를 작출하기위해 우선 마우스배아줄기세포를 EB배지에서 5일간 배양하여
수과원
표준기술
조준형외
배상체를작출하고, ITSF 배지에서8일간추가배양한결과, 둥근집락상태를유지하면서
담관세포분화유도및성상확인기법
(표준독성시험
완료(09.2.6)
활용
6인
주변부세포들이탈락한형태의신경전구세포를들을관찰할수있었다. 또한신경전구세
매뉴얼)
포특이발현단백질인CK8, NESTIN을확인한결과2차분화배양후양성반응을나타내
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