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농림축산검역검사기술개발사업2013 연구보고서
연구결과보고서 요약문
연구과제명
우결핵병의 혈청학적 진단법 개선을 위한 다중 항원개발
중심단어
우결핵병, 혈청학적 진단, 단백분석, 재조합단백질
주관연구기관
충남대학교
주관연구책임자
김 화 중
연구기간
2012. 11. 13 ~ 2013. 11. 30
○ 현재 우결핵의 혈청학적 진단에 사용되고 있는 주요 항원은 MPB70과 MPB83이다. 이들 항원의
민감도는 60-80%로 보고되고 있다. 혈청학적인 진단이 확진이라기보다는 다수를 대상으로 검진
할 수 있는 경제적인 방법임을 고려하면 민감도가 90%이상이 되면 이상적일 것이다.
○ 혈청학적 진단법의 가장 큰 제한점은 개개인의 면역반응 다양성 때문에 단일항원으로는 충분한
민감도를 얻을 수 없다.
○ 본 연구의 목적은 MPB70과 MPB83항원이외에 우결핵의 혈청학적 진단에 적용할 수 있는 새로운
항원을 발굴하고 그들의 진단적인 유용성을 평가하는데 있다.
○ 항원의 진단평가에 필수적인 임상검체를 수집하였다. PPD 피부반응검사 결과를 토대로 양성혈청
59검체, 음성혈청 96검체를 수집하였다.
○ 새로운 우결핵 진단항원 동정: 우결핵균의 배양액을 고전적인 생화학적 방법으로 일차 분획화를
실시하고, 각 분획을 대상으로 M. bovis 감염혈청을 사용한 immunoblotting분석으로 총 16개의 단
백항원을 발굴하였다. 이중 7개의 단백에 대해서는 대장균에서 재조합단백질을 생산 정제하였다.
○ 우결핵균 배양액으로부터 native MPB70과 native Ag85를 정제하였다.
○ 17개의 결핵항원에 대한 진단적인 유의성 평가를 통해 7개의 혈청학적 진단항원을 선별하였다.
○ 진단적인 유의성이 있는 지질항원인 LAM과 PIM을 정제하였다.
○ 수의과학검역원과 경상대에서 수집한 155검체를 대상으로 선별된 17개의 항원에 대한 IgG와 IgA
항체가를 ELISA로 측정하여 진단적인 유의성을 분석하였다.
- MPB70과 MPB83에 대한 IgA항체가 IgG항체보다 진단적인 유의성이 더 높았다.
- 혈청진단을 위한 다중항원으로 포함될 수 있는 항원으로 BCG_3488c외에도 6종을 최종 선별하
였다.
- IgA의 경우 MPB70+MPB83+38 kDa항원을 조합하면 91%의 민감도를, IgG의 경우
MPB70+MPB83+LAM+BCG_3488c를 조합하면 87.7%의 민감도를 나타내었다.
○ 총 10개의 항원으로 구성된 multiantigen print immunoassay (MAPIA)의 진단적인 유용성을 분석함.
1806 농림축산검역본부

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