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5. 연구용역 과제일람표 / 아. 농림축산검역검사 R&D 연구용역
1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도
연구목표
연구결과
달성도(%)
○ PPD 피부반응검사를 토대로 양성혈청 59검체와 음성
우결핵 임상 혈청 수집
100
96검체를 수집함.
○ 우결핵균 배양액을 고전적인 생화학적 방법으로 일차
분획화를 실시함.
○ 배양액 내의 주요 단백인 MPB70과 Ag85를 정제함.
각
분획을
분리하고
○
SDS-PAGE와
2-DE로
Immunoblotting으로 M. bovis 감염혈청에 반응하는
spot을 LC-MS/MS로 동정함.
○ 이러한 과정을 통해 총 16개의 새로운 혈청학적 항원
우결핵균 단백체분석을 통
을 동점함.
해 새로운 진단항원 발굴,
○ 동정된 단백질을 발현 벡터에 클로닝하여 7개의 단백
100
생산 및 진단적인 유의성
에 대한 재조합 단백질을 생산 정제함(BCG_2330,
평가
BCG_1909,
BCG_0389,
BCG_3488c,
BCG_3706c,
BCG_2765, BCG_1509c).
○ MPB70과 MPB83을 비교항원으로 새로 동정된 7개의
단백과 native Ag85항원에 대한 유의성 평가를 통해
6종(BCG_0389, BCG_1509c, BCG2330, BCG_ 2765,
BCG3488c, native BCGAg85)의 새로운 진단항원을 선별
함.
○ 17개의 결핵항원에 대한 진단적인 유의성을 평가하여
결핵의 혈청학적 진단항원
7개의 항원(38 kDa, HspX, CysA, Rv1605, Rv3593,
으로부터 우결핵 진단항원
100
MAV5183, MAV4300) 을 선별함.
발굴과 생산
○ 선별된 단백에 대한 재조합단백질을 생산함.
진단적인 유용성이 있는
○ 진단적인 유의성이 있는 지질항원인 LAM과 PIM을
100
준비함.
지질항원 탐색
○ 수의과학검역원의 60검체와 경상대학교에서 수집한
155검체를 대상으로 17개의 항원에 대한 IgG와 IgA항
체가를 ELISA로 측정하여 평가함.
○ MPB70과 MPB83에 대한 IgA항체가 IgG보다 진단적
최종 선별된 항원에 대한
인 유의성이 더 높았음.
100
의 진단적인 유의성 평가
○ 다중항원으로 포함될 수 있는 LAM, BCG_3488c, PIM,
Ag85, Rv3593, 38 kDa, HspX 등을 발굴함.
○ IgA의 경우 MPB70 + MPB83 + 38 kDa을 조합한 경우 91%
의 민감도를, IgG의 경우 MPB70+MPB83+LAM+ BCG_3488c
의 결과를 조합하면 87.7%의 민감도를 나타냄.
○ M. bovis의 CFP을 포함해서 총 10개의 항원을
다중항원을
이용한
nitrocellulose membrane에 선으로 흡착시켜 multiantigen
MAPIA의 우결핵 진단 적
90
print immunoassay (MAPIA)를 실시한 결과 진단적인
용 가능성 평가
적용 가능성이 높음을 증명함.
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www.qia.go.kr

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