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농림축산검역검사기술개발사업 2015 연구보고서
3
- VP0-렌티바이러스 : 10
이상 viral RNA 검출
5
- 3ABC-렌티바이러스 : 10
이상 viral RNA 검출
2) 구제역 바이러스 구조단백질 발현 세포주(helper cell) 작성
- 구제역바이러스 구조단백질(VP0) 발현세포주 작성
; BHK T7-9, BHK 21, LFBK, ZZR, IBRS-2
- VP3 단백질 발현 세포주 작성: BHK T7-9, ZZR
3) 구제역바이러스 비구조단백질(3ABC, 3D) 발현 세포주 작성
- 3ABC 발현세포주 : BHK T7-9, BHK 21, LFBK, ZZR, IBRS-2
- 3D 발현세포주 : BHK T7-9, BHK 21
? 일회증식 구제역바이러스 생산(2015)
가. 비구조단백질 발현 Helper cell(형질전환세포)를 이용한 일회증식 바이러스 제작
1) 3B 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 3ABC 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- 3ABC 발현 BHK T7-9 세포에 3B 유전자 결손/치환 감염성 cDNA transfection한 후 5대 및 10대 계대
세포에서 일회증식 바이러스 미확인
2) 3D 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 3D 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- 3D 발현 BHK T7-9, BHK21 및 ZZR 세포에 3D 유전자 결손/치환 감염성 cDNA를 transfection한 후
3대 계대 세포에서 일회증식 바이러스 미확인
나. 구조단백질 발현 Helper cell(형질전환세포)를 이용한 일회증식 바이러스 제작
1) VP0 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 VP0 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- BHK T7-9 세포에 VP0 유전자 결손/치환 감염성 cDNA를 transfection한 후 ZZR 세포에 계대한 결과
바이러스감염(세포변성)확인
- 증식 바이러스에 대한 유전자 분석결과 세포내 VP O 유전자가 결손부위에 Homologous recombination되어
O1 Manisa주와 동일한 것으로 확인
2) VP3 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 VP3 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- BHK T7-9 세포에 VP3 유전자 결손/치환 감염성 cDNA를 transfection한 다음 14대 계대한 결과 VP3
유전자가 결손된 유전체 확인
6. 색인용어
FMDV, Helper cell, Single cycle
7. 연구기간
2014 ? 2015 (2년)
1882
농림축산검역본부

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