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총괄 연구과제 요약
과제고유번호
Z-1543081-2014-15-01
제안부서/담당자
세균질병과 남향미
농장 및 도축장 식육 유래 L. monocytogenes 분리 현황 및 분자역학적 분석
과제명
(Prevalence of L. monocytogenes from Farm and Fresh Meat at Slaughterhouse
and Epidemiological Analysis by Molecular Method)
연구책임자
성명
윤요한
소속 기관명
숙명여자대학교 산학협력단
□ 계속 ??완료
총연구기간
2014년 10월 21일 ∼ 2015년 11월 30일 (1년 1개월)
연구목표
○ 농장, 도축장 식육, 인체감염환자로부터 L. monocytogenes 분리 및 병원성 확인과 유전자 상관성 분석을
통해 농장, 도축장 및 인체감염균주 간 분자역학적 분석
○ 국내 농장과 도축장 식육에서의 L. monocytogenes 오염 현황 및 인체감염균주 분석 뿐 아니라 병원성유전자
분석을 통한 L. monocytogenes 오염 실태자료 확보, 위해도 분석 및 오염경로를 분석한다.
연구내용
○ 인체감염균주는 대학병원과 질병관리 본부를 통하여 분양 받아 분석을 진행하였다.
○ 도축장 식육에서의 L. monocytogenes 분리주와 인체 감염 균주와의 상관성을 분석하기 위하여 전국의
권역별(중부, 영남, 호남) 도축장으로부터 소와 돼지의 출하 농장을 각각 3곳씩 선택하여 농장별로 3마리의
도체 둔부 swab과 맹장 내 분변을 동일한 개체에서 채취하였다.
○ L. monocytogenes가 분리 된 양성농장을 포함한 농장 68곳을 방문하여 농장별로 사일리지(10), 분변(10),
토양(10)과 돼지농장의 경우는 슬러지(1)를 각각 채취하여 분석하였다. 동일한 농장을 연 2-3회 방문하여
총 2,018개(사일리지 647개, 분변 677개, 토양 680개, 슬러지 14개)의 시료를 채취하여 분석을 진행하였다.
○ 시료를 채취한 후 Listeria Enrichment Broth와 Fraser broth 배지에 증균하여 PALCAM agar에 획선도말하고
Listeria species의 분리를 확인하였다. PALCAM agar에서 검은 구역을 형성하는 의심집락을 hly와 prs
primer를 사용한 PCR을 통해 L. monocytogenes를 확인하였고, 16s rRNA 분석을 통하여 L.
monocytogenes로 재확인하였다.
○ 분리된 L. monocytogenes에 대해서는 병원성 유전자 검사와 혈청형 분류를 통한 위해성 확인과 PFGE를
활용한 유전자 상관성 분석을 진행하였다.
- L. monocytogenes 분리 균주의 병원성을 확인하기 위해 병원성 유전자인 actA (Actin assembly-inducing
protein A), inlA (Internalin A), inlB (Internalin B), hlyA (Listeriolysin O), plcB (Phospholipase B)에
대해서 PCR하였다.
- 혈청형을 그룹화 할 수 있는 Multiplex-PCR과 Listeria antisera (Denka-seiken, Tokyo)의 응집반응을
통하여 L. monocytogenes 분리 균주의 혈청형을 분류하였다.
- 인체 분리균주와 도축장 식육 및 분변, 농장 환경에서 분리된 L. monocytogenes의 유전자 상관성을
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농림축산검역본부

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