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농림축산검역검사기술개발사업 2015 연구보고서
4. 당해년도 연구결과 요약
제 1세부과제명 : 야생조류 및 반추수에서 콜린에스터라제(ChE) 활성도 검사법 표준화 및 기본값 구축
1) ChE 활성도 검사법 개요
? ChE 활성도 검사법(Modified Ellman's method)의 원리: 기질 (Acetylcholine)을 첨가하여 시료내의 아세틸
콜린에스터라제에 의해 가수분해 된 choline의 양을 colorimetric방법으로 측정하여 시료내의 아세틸콜린
에스터라제 활성도를 평가
? ChE 활성도 검사 방법
- STD 준비→뇌(혈액)시료 준비→Reaction mix 및 Background mix준비→측정
? ChE 활성도 계산법
- 표준곡선에서 구해진 Optical density와 Choline농도간의 관계식으로부터 아세틸콜린에스터라제의 활성도를
산출
? 시료에서의 AChE 활성도 정량 및 중독증 판정
- 표준곡선과 직선회귀방정식을 이용한 AChE 활성도(μmol/min/g(mL)) 산출
- 정상 AChE값의 표준편차X2 이하, 조류에서는 AChE 정상값의 50%이상 저하가 나타나면 유기인계 농약에
의한 중독증을 사인으로 규정
2) ChE 활성도 검사법 표준화
A. 시료 채취
? 뇌의 채취 부위별 차이(대뇌/소뇌)
- 대뇌피질부위보다 소뇌부위에서 AChE 활성도가 25%가량 높게 측정되는 경향이 보였음
? 혈액의 채취 부분별 차이(전혈/적혈구/혈장)
- AChE의 활성도 값은 49개 정상시료의 적혈구에서 0.50±0.11, 전혈에서 0.37±0.10 μmol/min/ml로 적혈구
에서 약 1.4배 높게 나타났음
B. 보관기간
? 뇌시료의 보관기간에 따른 차이
- [~3주; 단기]야생조류 및 소 뇌의 경우 시료채취 직후 실온/냉장/냉동/초저온냉동의 조건에서 3주동안
보관하여 관찰한 결과, 3주이내 단기간 보관 시 보관온도 및 보관기간에 따른 유의한 차이는 보이지
않았으나 모든 보관조건에서 AChE 활성도가 감소하는 경향이 나타남(일주일 단위로 지속적으로 조사
중임)
- [~6개월; 장기]시료채취 직후 -80℃ 장기간 보관 시 보존기간이 길어짐에 따라 AChE의 활성도가 감소하는
경향이 나타났음
? 혈액 시료의 보관기간에 따른 AChE 활성도 차이
- 시료채취 직후 -4℃ 보관 후 2주간 보존 시 적혈구의 AChE의 활성도가 최대 24% 감소하였음
C. 희석배수의 영향
? 야생조류 뇌 시료의 희석배수에 따른 AChE 활성도 차이
- 희석을 실시하지 않은 경우 AChE 활성도가 평균 0.79 μmol/min/g로 나타났으나 10배 희석 시 평균
2.01 μmol/min/g로 약 2.5배 높은 값이 관찰되었음
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농림축산검역본부

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