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가졌다. 분생포자(n = 35)는 옅은 색에서 암갈색이었고 불규칙하고 타원형에서 난형
원뿔형이었다. 분생포자의 크기는 5~25 × 6~12 μm(n = 40)로 세로 격벽과 가로
격벽이 있습니다. 이러한 형태적 특징은 이전에 설명되었으며 Alternaria alternata에
해당합니다(Simmons 2007). 게놈 DNA는 액체 질소 및 페놀-클로로포름 추출 방법을
사용하여 균사체에서 추출되었습니다(Butler 2012). Alt-for/Alt-rev(Hong et al. 2005)
및 CALDF1/CALDR1(Lawrence et al. 2013) (Integrated DNA Technologies,
Coralville, IA, U.S.A.). PCR 반응은 다음 조건 하에서 SimpliAmp 열 순환기(Applied
Biosystems, Waltham, MA, U.S.A.)에서 수행되었습니다: 초기 변성: 94°C에서 1분,
94°C에서 30초 동안 변성, 57°C 어닐링의 경우 1분, 확장의 경우 1분 동안 72°C.
72°C에서 10분 동안의 최종 확장 단계도 포함되었습니다. 시퀀싱은 BigDye
Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems)를 사용하여 수행되었으며
시퀀스는 GenBank에 기탁 번호가 부여되었습니다. OL542696(Alt al) 및
OM471502(칼모듈린). 이들 서열은 BLAST 분석(MZ222274.1 및 MN473132.1)을
사용하여 GenBank의 다른 서열과 비교되었습니다. 계통발생학적 분석은 MEGA 6
소프트웨어(Pennsylvania State University, University Park, PA, U.S.A.)로
수행되었습니다. 병원성을 확인하기 위해 눈에 띄는 병리가 없는 다른 지역의 건강한
나무에서 10개의 thuja 가지에 분생포자 현탁액(100 분생포자/ml, 2주 배양에서
얻음)을 접종했습니다. 대조군 샘플에 멸균 증류수로 접종하였다. 접종한 가지를 멸균
플라스틱 용기에 넣어 높은 습도를 유지하고 28°C에서 10일 동안 배양했습니다. 7일
후 접종 부위에 불규칙한 병변과 진균 증식이 관찰되었다. 환부는 위에서 설명한 것과
유사한 증상으로 점차적으로 크기가 증가했습니다. 병원체의 재분리 및 형태학적 특징
및 시퀀싱을 기반으로 한 식별은 A. alternata의 존재를 확인했습니다.
이것은 카자흐스탄의 미국측백나무 가지에 영향을 미치는 Alternaria alternata
(알타나리아 알타나타)의 첫 번째 보고입니다. 미국측백나무 Thuja는 이 지역의
희귀종입니다. 비용과 관리가 비쌉니다. 이 연구는 Alternaria spp.에 의해 유발된
질병의 시기적절한 진단을 가능하게 할 것입니다. 곰팡이 감염으로 미국측백나무
thuja를 치료하기위한 예방 조치와 프로토콜을 개발할 필요가 있습니다.
3. 원 문
First Record of Alternaria alternata Causing Necrosis of Thuja (Thuja occidentalis) in
Kazakhstan
Ainura Smagulova, Rabiga Uakhit, and Vladimir Kiyan
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