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KOLAS 유전자변형생물체(LMO
) 실험 매뉴얼
않을 경우, 재실험을 실시한다.
5.5.3. 전기영동을 통해서 검사 시료에서 목적 크기의 증폭 DNA가 확인된 경우 양성으로 한다. 다만,
음성대조구에서 DNA 증폭이 되지 않고, 양성대조구에서 목적 크기의 증폭 DNA가 확인되어야
한다.
5.5.4. 전기영동을 통해서 검사 시료에서 목적 크기의 증폭 DNA가 확인되지 않는 경우 음성으로
한다. 다만, 음성대조구에서 DNA 증폭이 되지 않고, 양성대조구에서 목적 크기의 증폭 DNA가
확인되어야 한다.
5.5.5. 양성으로 판정된 경우, 계통 검사(Event-specific PCR test)를 실시한다.
6. 계통 검사(Event-specific test)
6.1. 콩 계통 DAS-68416-4와 DAS-44406-6에 대한 PCR 검사법의 프라이머 정보는 다음과 같다.
증폭크기
품목
계통
프라이머명
염기서열(5'-3')
(AT)
416-1F
5'-TAC TTG CTC**********************-3'
128 bp
DAS-68416-4
(60 ℃)
416-1R
5'-GGG CCT AAC**********************-3'
콩
(Soybean)
4406-F
5'-GCG CAC CCT**********************-3'
143 bp
DAS-44406-6
(57 ℃)
4406-R
5'-AAT TGC GAG**********************-3'
6.2. LMO 계통 PCR 검사는 시중에서 판매되는 PCR premixture를 이용한다.
6.3. PCR 반응 조건은 다음과 같다.
Denaturation
94 ℃
5 min
Denaturation
94 ℃
30 sec
35
Annealing
60/57 ℃* 30 sec
cycles
72 ℃
30 sec
elongation
Final elongation
72 ℃
7 min
* 반응온도 및 시간, cycle 수는 각 이벤트에 최적화된 조건을 사용한다.
6.4. 결과 판정
6.4.1. 전기영동을 통해 타겟 증폭산물의 유무를 확인한다.
6.4.2. 내재유전자 증폭을 통해 정상적인 PCR 반응이 일어났음을 확인한다. 내재유전자가 증폭되지
않을 경우, 재실험을 실시한다.
6.4.3. 전기영동을 통해서 검사 시료에서 목적 크기의 증폭 DNA가 확인된 경우 양성으로 한다. 다만,
음성대조구에서 DNA 증폭이 되지 않고, 양성대조구에서 목적 크기의 증폭 DNA가 확인되어야 한다.
6.4.4. 전기영동을 통해서 검사 시료에서 목적 크기의 증폭 DNA가 확인되지 않는 경우 음성으로 한다.
다만, 음성대조구에서 DNA 증폭이 되지 않고, 양성대조구에서 목적 크기의 증폭 DNA가 확인
되어야 한다.
150 농림축산검역본부

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