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폭되었습니다(Lee et al. 1998 및 해당 참조). 트랜스로카제 단백질(secY) 유전자는
AYsecY_F-46(5'-AAGCAGCCATTTTAGCAGTTG-3')
및
AYsecY_R1450(5'-AAGTAATCAGCTATCATTTGGTTAGT-3') 프라이머 쌍을 사용하여
증폭되었으며, 이는 AY(Aster Yellows) 식물성 플라스마를 기반으로 설계되었습니다.
GenBank에서
사용할
수
있는
secY
시퀀스.
신장
인자
Tu(tuf)는
fTuf1/rTuf1(Schneider and Gibb 1997) 프라이머 쌍을 사용하여 증폭되었습니다. 열자
전거 조건은 98°C에서 2분간, 98°C에서 30초, 60 또는 55°C(tuf의 경우)에서 30초,
72°C에서 1분간 32주기, 최종 연장으로 구성되었습니다. Phusion High-Fidelity DNA
Polymerase(New England Biolabs, Ipswich, MA)를 사용하여 72°C에서 10분간. 예상
크기(P1/P7: 1.8kb, R16F2n/R16R2: 1.1kb, AYsecY_F-46/AYsecY_R1450: 1.5kb 및
fTuf1/rTuf1: 1.1kb)의 앰플리콘은 모든 증상이 있는 식물에서 생성되었지만 무증상 식
물에서는 생성되지 않았습니다. 증폭된 PCR 생성물을 겔 정제하고 CloneJET PCR 클
로닝 키트(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)를 사용하여 pJET1.2/블런트 클로
닝 벡터에 결찰시켰습니다. pJET1.2 정방향 및 역방향 프라이머를 사용하여 LGC
Genomics(독일 베를린)에 의해 클로닝된 PCR 단편(각 PCR 반응으로부터 최소 3개)을
양방향에서 서열분석하고, 획득된 서열을 GenBank에 보관했습니다. 16S rRNA 유전자
서열(GenBank 등록 번호 ON594635 및 ON594636)은 'Candidatus Phytoplasma
asteris' 16SrI-B 하위 그룹의 Onion yellows phytoplasma 균주 OY-M(GenBank
AP006628)과 각각 100% 및 99.95% 동일성을 나타냈습니다. iPhyClassifier 분석에서
16S rDNA의 가상 RFLP 패턴은 16Sr 그룹 I, 하위 그룹 B(GenBank AP006628)의 참
조 패턴과 동일했습니다(유사성 계수 = 1.00). 이는 Schneider et al.의 결과와 일치합
니다. (1997) 및 Seemuller et al. (1998) 독일에서는 시클라멘 질병과 관련된 식물성
플라스마가 16SrI-B 하위 그룹에 포함되었습니다. 이탈리아(Alma et al. 2000)와 이스
라엘(Weintraub et al. 2007)의 다른 연구에서는 16SrI-C 및 16SrXII-A 그룹에 속하는
식물성 플라스마가 시클라멘 질병과 연관되어 있음이 밝혀졌습니다. 획득된 secY 및
tuf 유전자 단편(GenBank ON564432 및 ON515746)은 양파황색 식물플라스마 균주
OY-M과 각각 99.3 및 99.9%의 서열 동일성을 공유했습니다.
우리가 아는 한, 이것은 헝가리의 시클라멘에서 Candidatus Phytoplasma asteris의 첫
발생입니다.
3. 원 문
First Report of ‘Candidatus Phytoplasma asteris’ Associated with Cyclamen Little Leaf in
Hungary
Orsolya Viczian, Jozsef Fodor, Janos Agoston, and Emese Mergenthaler
- 658 -
AYsecY_F-46(5'-AAGCAGCCATTTTAGCAGTTG-3')
및
AYsecY_R1450(5'-AAGTAATCAGCTATCATTTGGTTAGT-3') 프라이머 쌍을 사용하여
증폭되었으며, 이는 AY(Aster Yellows) 식물성 플라스마를 기반으로 설계되었습니다.
GenBank에서
사용할
수
있는
secY
시퀀스.
신장
인자
Tu(tuf)는
fTuf1/rTuf1(Schneider and Gibb 1997) 프라이머 쌍을 사용하여 증폭되었습니다. 열자
전거 조건은 98°C에서 2분간, 98°C에서 30초, 60 또는 55°C(tuf의 경우)에서 30초,
72°C에서 1분간 32주기, 최종 연장으로 구성되었습니다. Phusion High-Fidelity DNA
Polymerase(New England Biolabs, Ipswich, MA)를 사용하여 72°C에서 10분간. 예상
크기(P1/P7: 1.8kb, R16F2n/R16R2: 1.1kb, AYsecY_F-46/AYsecY_R1450: 1.5kb 및
fTuf1/rTuf1: 1.1kb)의 앰플리콘은 모든 증상이 있는 식물에서 생성되었지만 무증상 식
물에서는 생성되지 않았습니다. 증폭된 PCR 생성물을 겔 정제하고 CloneJET PCR 클
로닝 키트(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)를 사용하여 pJET1.2/블런트 클로
닝 벡터에 결찰시켰습니다. pJET1.2 정방향 및 역방향 프라이머를 사용하여 LGC
Genomics(독일 베를린)에 의해 클로닝된 PCR 단편(각 PCR 반응으로부터 최소 3개)을
양방향에서 서열분석하고, 획득된 서열을 GenBank에 보관했습니다. 16S rRNA 유전자
서열(GenBank 등록 번호 ON594635 및 ON594636)은 'Candidatus Phytoplasma
asteris' 16SrI-B 하위 그룹의 Onion yellows phytoplasma 균주 OY-M(GenBank
AP006628)과 각각 100% 및 99.95% 동일성을 나타냈습니다. iPhyClassifier 분석에서
16S rDNA의 가상 RFLP 패턴은 16Sr 그룹 I, 하위 그룹 B(GenBank AP006628)의 참
조 패턴과 동일했습니다(유사성 계수 = 1.00). 이는 Schneider et al.의 결과와 일치합
니다. (1997) 및 Seemuller et al. (1998) 독일에서는 시클라멘 질병과 관련된 식물성
플라스마가 16SrI-B 하위 그룹에 포함되었습니다. 이탈리아(Alma et al. 2000)와 이스
라엘(Weintraub et al. 2007)의 다른 연구에서는 16SrI-C 및 16SrXII-A 그룹에 속하는
식물성 플라스마가 시클라멘 질병과 연관되어 있음이 밝혀졌습니다. 획득된 secY 및
tuf 유전자 단편(GenBank ON564432 및 ON515746)은 양파황색 식물플라스마 균주
OY-M과 각각 99.3 및 99.9%의 서열 동일성을 공유했습니다.
우리가 아는 한, 이것은 헝가리의 시클라멘에서 Candidatus Phytoplasma asteris의 첫
발생입니다.
3. 원 문
First Report of ‘Candidatus Phytoplasma asteris’ Associated with Cyclamen Little Leaf in
Hungary
Orsolya Viczian, Jozsef Fodor, Janos Agoston, and Emese Mergenthaler
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