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차아염소산나트륨 용액으로 2분간 소독한 후 멸균수로 2회 헹구고 두었습니다. 감자
포도당 한천(PDA; Scharlau Chemie, 스페인)에서. 배양물을 암실에서 8일 동안 26°C
에서 배양했습니다. 18개의 분리주가 회수되었고, 2개의 대표적인 단일 포자 분리주
(KSU-CgM17 및 KSU-CsM42)가 추가 연구에 사용되었습니다. KSU-CgM17의 PDA
배양물은 처음에는 공중 백색 균사체를 가졌으나 나중에는 회색에서 회흑색으로 변했
습니다. 배양물이 숙성됨에 따라 연한 연어에서 오렌지색의 분생포자 덩어리가 균사체
판 표면에서 관찰되었습니다(14일 된 PDA 배양물). KSU-CsM42에 의해 생성된 콜로
니는 28°C에서 10일 후 배양물 밑면이 솜같은 균사체와 회백색을 띠는 황백색 내지 회
색이었습니다. 이 두 분리체의 분생포자는 무균형이고 원통형에서 거의 직선형이며 투
명하고 양쪽 끝이 둥글었습니다. 분생포자(n = 50) 측정값은 KSU-CgM17의 경우 길이
16~18.0μm × 폭 4.8~6.4μm, KSU-CsM42의 경우 길이 12.6~17.5μm × 폭
3.2~4.5μm입니다. 현미경적 및 배양적 특징은 Colletotrichum gloeosporioides 종 복
합체의 특징과 유사했습니다(Weir et al. 2012). 분자 분석을 통해 이러한 분리물을 추
가로 확인하기 위해 4개의 게놈 DNA 유전자좌, 즉 내부 전사 스페이서(ITS) 영역과 칼
모듈린(CAL), 베타-튜불린 2(TUB2) 및 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소(GAPDH)
유전자를 분석했습니다. 증폭되고 서열이 분석됩니다(Hu et al. 2015; Weir et al.
2012). 모든 서열은 각각 KSU-CgM17 및 KSU-CsM42에 대해 수탁 번호 OQ791412
및
OQ791413(ITS),
OQ786847
및
OQ786851(CAL),
OQ786849
및
OQ786850(TUB2), OQ786848 및 OQ786852(GAPDH)로 GenBank에 기탁되었습니다.
GenBank에
대한
BLAST
검색을
통해
이러한
병원체는
Colletotrichum
gloeosporioides(KSU-CgM17) 및 Colletotrichum siamense(KSU-CsM42)인 것으로 나
타났습니다. 병원성은 분리된 커피 잎과 녹색 및 빨간색 열매에 대해 테스트되었습니다
(Cao et al. 2019). 접종을 위해 건강한 잎과 열매를 멸균된 바늘로 상처를 입히고 촉
촉한 여과지가 담긴 페트리 접시에 넣은 다음 10μl의 분생자 현탁액(106포자/ml)을 접
종했습니다. 음성대조군으로는 멸균 증류수를 사용하였다. 분리물당 6개의 반복 실험을
수행했으며, 실험은 한 번 반복되었습니다. 접종된 커피 재료를 25°C 및 100% 상대습
도에서 8일 동안 배양했습니다. 6일 후에 접종된 커피 재료의 100%에서 괴사 병변이
발생한 반면, 음성 대조군에서는 증상이 없었습니다. Koch의 가정은 이들 종의 전형적
인 군집이 증상이 있는 조직에서 성공적으로 재분리되었을 때 충족되었습니다. 이러한
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